Lady Diana blev født den 1. juli 1961 i Park House, Sandringham, Norfolk. Hun var den yngste datter af John Spencer, Viscount Althorp, og Frances Roche. Diana havde en ældre søster, Sarah, og to ældre brødre, Charles og Robert. Hendes forældre blev skilt, da hun var seks år gammel. Diana boede derefter hos sin far og stedmor indtil sin fars død i 1992.

Diana gik på Miss Porter’s School i Farmington, Connecticut. Efter at have afsluttet high school i 1979 arbejdede hun i to år på Young England Kindergarten i London.

I 1980 mødte Diana prins Charles ved et velgørenhedsarrangement. De to begyndte at date og blev gift den 29. juli 1981 i St. Paul’s Cathedral i London. Parret fik to sønner: Prins William Arthur Philip Louis (født 1982) og prins Henry Charles Albert David (født 1984).

Efter skilsmissen fra prins Charles i 1996 fortsatte Diana med at arbejde for forskellige velgørenhedsorganisationer. Den 31. august 1997 blev hun dræbt i en bilulykke i Paris. Hun var 36 år gammel.